label free 非標定量蛋白質組學

 蛋白質非標記定量技術(label-free是通過液質聯用技術對蛋白質酶解肽段進行質譜分析,無需使用昂貴的穩定同位素標簽做內部標準,只需分析大規模鑒定蛋白質時所產生的質譜數據,比較不同樣品中相應肽段的信號強度,從而對肽段對應的蛋白質進行相對定量。Label-free的技術優勢就在于蛋白質不需要進行標記,所需樣品總量少,耗費低。


技術原理



                                                                                                 label free流程示意圖

非標記定量蛋白質組學近年來成為重要的質譜定量方法,按照其原理分,主要有兩種。其中spectrum counts類的非標記定量方法,發展比較早,也形成了多種算法進行定量,但是主要的原理都是根據MS2的鑒定結果作為定量的基礎,各種方法的差別在于后期算法在大規模數據上的修正。第二種非標記定量方法的原理是以MS1為基礎,計算每個肽段信號在LCMS質譜上的積分,這個也是本公司所采用的Maxquant算法的原理。

 服務流程


                                             


技術優勢

1.無需昂貴的同位素標簽標記,實驗耗費低,操作簡單;

2.對樣本的操作少,并且不受樣本數目的現在,客服了標記定量技術在對多個樣本進行定量方面的缺陷;

3.可以檢測到的肽段動態范圍可以達到4個數量級以上,提高低豐度蛋白的檢出率和非標定量的準確性;

4.可以檢測不同組樣本中有無差異的蛋白變化;

5.樣本需求量少


儀器類型

Thermo Scientific Q Exactive


樣本要求

1.蛋白運輸:24小時內可以4℃運輸;

2.蛋白長期保存:-20℃;

3.待檢測蛋白要求:蛋白量最低300μg,濃度最低要求為1μg/μl,否則同位素無法標記;

4.蛋白提取試劑要求:使用普通的組織、細胞裂解液即可,切忌不要使用二維電泳試劑提取;

5.直接提供組織或細胞:動物、微生物組織濕重>10mg;植物鮮嫩組織>100mg;細胞量>107個;血液體積>500μl。 

 



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