非標記磷酸化蛋白質組學定量(Pho-Label free)


蛋白質磷酸化:指由蛋白質激酶催化的把ATP的磷酸基轉移到底物蛋白質氨基酸殘基(絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸)上的過程,或者在信號作用下結合GTP,是生物體內一種普通的調節方式,在細胞信號轉導的過程中起重要作用。

蛋白質發生磷酸化是重要的翻譯后修飾,它與信號傳導、細胞周期、生長發育以及癌癥機理等諸多生物學問題有密切關系。研究蛋白質磷酸化對闡明蛋白質功能具有重要意義。

蛋白質磷酸化組學運用磷酸化肽特異性富集方法聯合非標定量技術,對組學水平的磷酸化肽進行定性定量分析。


技術原理

本公司將磷酸化(Phospho-rylation)肽段TiO2富集技術和蛋白質非標記定量技術(label-free)相結合,實現對磷酸化蛋白質組學的定性、定量研究。其中富集手段包含了公司技術團隊多年相關領域經驗技術,可有效保證磷酸化肽的超高富集率。


實驗流程

磷酸化-非標實驗流程:

1.收集不同組別的樣本并分別提取蛋白質,評估樣本狀態、蛋白含量是否充足,后續設計實驗給出建議;

2.蛋白質經過還原,封閉后用胰蛋白酶酶切;

3.TiO2富集(博士團隊特有技術優化、保證富集率;

4.Thermo Scientific Q Exactive高靈敏質譜檢測; 

5.專業生物信息團隊定制經典及個性化服務                                                                                                                                                                                                                                       



技術優勢

1.專業相關領域技術支持團隊;

2.經驗豐富的實驗操作人員,富集效率>90%;

3.獨立研發改進的具有技術領先地位的操作方法;

4.動物植物多種案例經驗累積;

5.強大的生物信息分析團隊。


應用領域

科研: 研究特定疾病發生的遺傳變異,如單基因遺傳病、罕見疾病基因檢測等。

臨床: 用于癌癥易感位點檢測、單基因遺傳位點檢測、心腦血管用藥指導基因檢測等。

健康: 用于疾病預防及管理,生活方式指導等相關的大眾消費基因檢測。

農業: 用于品系鑒定、優勢性狀篩選、群體遺傳學分析、親緣關系分析等。

動植物: 動植物生長發育、抗病、抗逆機制研究以及育種研究。同時可實時更新和補充關聯信息的完整性。

醫學: 闡釋疾病的發生發展機制,發現與疾病相關的生物標志物, 以應用于疾病診斷、治療、預后及用藥研究。


平臺介紹

Thermo Scientific Orbitrap Fusion Lumos Tribrid 三合一質譜儀是行業領先的高性能質譜儀,采用全新的高容量離子傳輸管(HCTT)、電動離子漏斗(EIF)、先進的四極桿技術(AQT)、先進的真空技術(AVT)和 ETD HD,進一步提高靈敏度。

新型 Orbitrap Fusion Lumos MS 功能

?  新型高靈敏度 API 接口將高容量離子傳輸管和電動離子漏斗結合,旨在提高離子流,降低檢測限

?  先進的主動離子束傳輸組件(Advanced Active Beam Guide)可防止中性粒子和高速離子簇進入解析離子的四極桿中

?  先進的四極桿技術結合高靈敏度和離子傳輸效率,使選中離子從分離窗口中心穿過

?   先進的真空技術提高了向 Orbitrap 分析儀傳輸高分子量離子的速度

?  全新的 ETD HD—高動態范圍 ETD 顯著提升了碎片離子覆蓋范圍

成熟的 Tribrid MS 功能

?  Tribrid 三合一結構—包括四極桿質量過濾器、線性離子阱和 Orbitrap 質量分析器

? 高達 500,000 FWHM 的超高分辨能力,質荷比為 200 時的同位素分辨率高達 240,000 FWHM

?  Orbitrap 和線性離子阱 MS 的采集速率高達 20 HzMSn分析

?  MS 和 MSn 完全并行化使用智能 ADAPT?(所有動態可用并行時間)技術進行分析

? MS 和 MSn 的同步離子選擇 (SPS)實驗不僅顯著提高識別的多肽和蛋白質數量,還能提高定量分析的準確性(當使用同量異序質量標記時)

?  裂解的靈活性 — CID、HCD 和可選 ETD 和 EthcD,在 MSn 的任何階段采用Orbitrap 或線性離子阱檢測時均可使用上述功能,以測定代謝物、聚糖和其他小分子的詳細結構

 通用方法適用于大部分肽段鑒定,無需針對濃度未知的樣品進行方法優化,從而降低了常規肽段實驗所需的樣品和儀器時間要求

?  直觀、靈活的拖放式用戶界面簡化了方法開發,可實現獨特而復雜的工作流程


樣品要求

1.細胞樣品:細胞量>108個;

2.組織樣品:動物、微生物組織濕重>10mg;植物鮮嫩組織>100mg。 



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