糖基化蛋白質組學 

蛋白質的N-糖基化位點修飾是最重要的蛋白質翻譯后修飾之一,主要在復雜的多細胞或組織形成過程中起關鍵作用。蛋白質的N-糖基化修飾位點具有保守的氨基酸序列NX(S/T),其中X為除脯氨酸以外的其它氨基酸。


技術原理

凝素親和法是目前糖蛋白質組學中應用最廣泛的分離富集方法。凝集素(lectin)是一類糖結合蛋白質,能專一識別某一特殊結構的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結合,它們與糖鏈可逆非共價結合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后,通常用特定的單糖通過競爭結合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來。蛋白質經過酶解后利用凝集素(lectin)富集N-糖基化肽段,然后用N-糖酰胺酶(PNGase)切除連接在天冬酰胺殘基(Asn)上的糖鏈。該處理致使Asn分子量增加0.9890Da。最后用高精度LC-MS質譜儀檢測脫糖后的肽段,并通過Maxquant軟件檢索數據庫,確認脫糖后分子量與其理論分子量的變化以及糖基化修飾肽段的序列,從而確定該蛋白質的N-糖基化位點。

N-糖基化位點確定之后,再利用label-free的原理對其進行定量分析。



    實驗流程



                                                                  



應用領域

科研: 研究特定疾病發生的遺傳變異,如單基因遺傳病、罕見疾病基因檢測等。

健康: 用于疾病預防及管理,生活方式指導等相關的大眾消費基因檢測。

農業: 用于品系鑒定、優勢性狀篩選、群體遺傳學分析、親緣關系分析等。

動植物: 動植物生長發育、抗病、抗逆機制研究以及育種研究。同時可實時更新和補充關聯信息的完整性。

醫學: 闡釋疾病的發生發展機制,發現與疾病相關的生物標志物, 以應用于疾病診斷、治療、預后及用藥研究


儀器類型

Thermo Scientific Q Exactive,Orbitrap Fusion


樣品要求

1.SDS-PAGE條帶:5個以上可見考染條帶;

      2.溶液(目標蛋白質):目標蛋白質總量>50μg,目標蛋白質純度>80%;

      3.溶液(大規模蛋白質組):濃度>1μg/μl,蛋白總量>1mg。 


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