MALDI-TOF技術

MALDI-TOF技術主要對單一蛋白質(考/銀染的2D或DIGE膠點樣本)或成分比較簡單的蛋白混合液進行定性分析。

技術原理

MALDI-TOF技術——利用基質輔助激光解吸電離(MALDI)/飛行時間(TOF)技術來表征生物分子,基質輔助激光解析(MALDI)技術是將樣品均勻包埋在基質中,基質吸收激光提供的能量而蒸發,攜帶部分樣品分子進入氣相,并將一部分能量傳遞給樣品分子使其離子化。TOF的原理是離子在電場作用下加速飛過飛行管道,根據到達檢測器的飛行時間不同而被檢測,即測定離子的質荷比(M/Z)與離子的飛行時間成正比,從而檢測離子MALDI-TOF在分子量可測范圍內,分辨率和所測分子量的準確性等方面都優于同類技術。采集數據漸變,大大簡化從樣品制備到數據分析的過程。在windows操作界面下通過鼠標來改變參數,變化激光強度和編制報告。可分別調節離子,加速柵和反射器電壓等,控制樣品的位置和激光照射的輕度。高準確度的質量數據增強了數據庫的查詢能力,可減少測量參數和鑒定結構所需的實驗數據。分析能力強-溫和的離子化條件增強了測量生物多具體,蛋白質,肽和DNA的能力。

                                                                               

                                                                  

                                                                                                  MALDI-TOF/TOF儀器結構原理圖

實驗流程

                                 

儀器型號

MALDL-TOF/TOF質譜儀4800(ABI),布魯克ultrafleXtreme MALDI TOF/TOF


技術優勢

適合較純、成分簡單或單一的蛋白樣品,如銀染或考染的蛋白膠點、標簽純化的蛋白樣品

周期短


應用領域

蛋白質或多肽的鑒定分析


樣品要求

1.雙向凝膠電泳點:考染、銀染(質譜兼容)點清晰可見;

2.蛋白質溶液:單一蛋白質,純度>90%,蛋白總量>5μg,濃度>0.1μg/ul;

3.SDS-PAGE條帶:單一蛋白質,純度>90%,考染、銀染(質譜兼容)點清晰可見;

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